Главным героем выступает потомок Альтаира - Эцио Аудиторе де Фиренце, молодой флорентийский аристократ. Игрок побывает в Италии 1476 года и встретится с выдающимися людьми того времени - к примеру, с Леонардо да Винчи и Никколо Макиавелли. У героя появятся новые способности, к примеру он будет плавать и нырять, а также сможет выхватить оружие у врага во время боя.